傳統(tǒng)的抗體制備都是從抗原刺激免疫動物產(chǎn)生強烈免疫應答開始，其中單克隆抗體是從免疫動物脾臟取B細胞與無限增殖的瘤細胞體外融合，對融合成功的雜交瘤細胞進行亞克隆，從而根據(jù)應用目的篩選對應的細胞株，然后通過細胞培養(yǎng)或收集腹水進一步純化得到抗體；而多克隆抗體是采集動物抗血清，直接親和純化得到抗體。不管是哪種抗體的制備，都離不開高效的動物免疫。

單克隆抗體的制備流程示意圖多克隆抗體的制備流程示意圖

    動物免疫利用的是生物體自身的體液免疫應答機制，通過抗原的持續(xù)刺激先后啟動初級免疫反應和次級免疫反應，實際操作中以血清中抗體效價來衡量實際免疫效果?？乖碳C體后啟動初級反應一般會有一個滯后期，此時幼B細胞經(jīng)過克隆篩選、增殖，然后分化成記憶細胞或漿細胞。經(jīng)過滯后期，血清效價呈指數(shù)增長達到一個峰值然后下降。初級免疫反應中，會首先分泌IgM，然后經(jīng)過抗體亞型轉(zhuǎn)換，IgG比例會升高。

次級免疫反應的啟動依賴于記憶B細胞和記憶T細胞的數(shù)目，記憶細胞再次遇到相同抗原就能被激活，從而導致次級免疫反應的發(fā)生。當記憶細胞數(shù)目遠大于幼B細胞時，次級反應啟動更快、強度更大。次級反應相比初級反應滯后期更短，漿細胞和血清效價的峰值更高，持續(xù)時間更長。同時，此時分泌的抗體經(jīng)過親和力成熟和亞型轉(zhuǎn)換，質(zhì)量更高。

一般免疫進程中血清效價變化曲線示意圖

動物免疫一般選擇健康的年青成年雄性動物，免疫系統(tǒng)發(fā)育成熟且不受性周期的影響而發(fā)生波動。為確保動物在整個免疫進程中的健康無疫病狀態(tài)，除了對動物來源有要求外，飼養(yǎng)環(huán)境也需進行控制。嚴格來說，動物需飼養(yǎng)于SPF級屏障系統(tǒng)內(nèi)，實施嚴格的微生物和寄生蟲控制。

菲恩生物免疫基地小鼠飼養(yǎng)SPF級車間和兔飼養(yǎng)潔凈區(qū)

    通常抗原需要先用佐劑乳化后再行注射，抗體制備中最常用的弗氏佐劑主要成分為礦物油和羊毛脂，其中首次免疫需使用添加卡介苗或滅活的結(jié)核分枝桿菌的弗氏完全佐劑。佐劑的作用主要是延緩抗原的釋放，增強吞噬細胞的吞噬和對抗原的呈遞?？乖瓨O為寶貴時可采用淋巴結(jié)內(nèi)微量注射，此時可不使用佐劑，抗原只需10～100μg。

開始一項免疫，除了上面提到的通用性原則，還需要考慮動物種屬的選擇、免疫劑量的使用、注射方式以及間隔時間的控制。

01、抗原與免疫動物的種屬差異越遠越好；親緣關(guān)系太近，意味著抗原同源性高不被免疫系統(tǒng)識別；另外，要注意有些抗原在免疫某些種類動物時免疫原性極差，如胰島素對家兔、多種酶類（如胃蛋白酶原等）對山羊等，免疫時皆不易出現(xiàn)抗體。

02、免疫劑量應根據(jù)抗原性強弱、分子量大小和免疫時間做相應調(diào)整?？乖慷?，時間間隔長，劑量可適當加大。大動物抗原劑量（以蛋白抗原為準）約0.5～1mg/只，小動物約0.1～0.6mg/只。有時主觀希望加強免疫效果而不適當?shù)丶哟髣┝浚鶗沙勺尽?/p>

03、 免疫注射的途徑有多種，包括足掌、肘窩、頸背部等淋巴結(jié)密集區(qū)皮下和皮內(nèi)注射，另外還有肌肉注射和靜脈注射。最廣泛使用的是皮下注射方式，某些情形下皮內(nèi)注射有優(yōu)勢。

常見的免疫注射途徑

04、免疫間隔時間也是重要因素，特別是首次與第二次之間更應注意。第一次免疫后，一般以間隔10～20天為好。二次以后每次的間隔一般為7～10天，不能太長，以防刺激變?nèi)酰贵w效價不高。免疫的總次數(shù)多為5～8次，半抗原需經(jīng)長時間的免疫才能產(chǎn)生高效價抗體，有時總時間為一年以上。

建議：實際操作中，免疫劑量、免疫部位以及間隔時間的組合都會對免疫結(jié)果產(chǎn)生較大影響，需對抗血清效價進行監(jiān)控，根據(jù)實際的免疫效果調(diào)整，不可生搬硬套。